歡迎您訪問武漢艾美捷科技有限公司官方網站!
站點地圖 服務熱線:400-6800-868
  • 産品
  • 文章

AGENT BRAND

品牌專題

當前位置:首頁 > 品牌專題

BioVendor miRNA定量检测试剂盒(PCR法)

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-07-06     
分享到:





miRNA是許多人類病理學中有潛力的診斷和預後生物標志物,如何准確對miRNA進行定量呢?前期我們介紹了免疫法定量miRNA的試劑盒,今天介紹常規基于PCR法的miRNA定量的試劑盒——雙尾RT-qPCR。


傳統microRNA PCR檢測方法的痛點:用传统的PCR法检测microRNA的挑战在于,两个常规PCR引物的总长度几乎是microRNA长度的两倍,因此不适合于做miRNA的引物。以前的技术通过使用发夹引物延伸microRNA,添加poly A尾巴或通过连接添加片段来解决这个问题,但是这会降低检测的灵敏度和特异性。此外,这些方法无法检测在3'末端修饰的microRNA,因为它会干扰延伸过程。

 

市面上常見的miRNA定量檢測試劑盒原理

市面上常見的miRNA定量檢測試劑盒原理

 

BioVendor专利産品——双尾RT-qPCR

我們專利的雙尾RT-qPCR技術,具有獨特的RT引物機制,與其他方法相比,可提供出色的靈敏度和特異性。雙尾RT-qPCR技術已被開發用于總的miRNA和piRNA的定量。

 

双尾RT-qPCR原理:与使用单个结合探针不同,双尾PCR使用两个半探针,它们分别结合到不同的microRNA片段上,这些片段通过折叠的系链连接。虽然每个半探针本身都很短, 无法结合到microRNA上,但当两个半探针互补时,它们会协同结合,这种结合的特异性是非常高的,因为在短半探针中错配的影响非常大。然后可以使用两个特定序列引物对形成的cDNA进行PCR扩增,用SYBR进行检测。

 

双尾RT-qPCR原理

 

雙尾RT-qPCR優勢:

  • 高靈敏度(最多少于10個分子)

  • 高特異性

  • 適合于多種樣本(血漿/血清,血液,組織等)中的miRNA檢測和定量

  • 通過折疊的系鏈連接的兩個半探針(結合不同的microRNA片段)

  • 动态范围广(高达9 log)

  • 在進行單重qPCR之前,可進行雙管多重RT-PCR

  • 提供定制化服務

 

1.高靈敏度及特異性:

  • 5?互補片段顯著提高分析的靈敏度:


 双尾RT-qPCR优势

  • 5? 互补片段显著提高检测的特异性:


 双尾RT-qPCR优势


5′-hemiprobe的特异性及灵敏度验证:为了测试5′-hemiprobe对特异性的贡献,我们比较了两种双尾RT引物区分Let-7 miRNA家族的两个成员:Let-7a和Let-7f的能力,它们仅有位于miRNA序列中心的单个核苷酸的差异。RT 1引物的5'-hemiprobe设计成与let-7a的5'-末端的前十个核苷酸结合, 而RT 2引物的5'-hemiprobe结合在let-7a的8个核苷酸上,通过这种设计,区分let-7a和let-7f的核苷酸只是由RT 2引物的5′-hemiprobe检测的,而不是由RT 1引物检测的。RT 2引物的5′-hemiprobe也很短(8个核苷酸),因为我们认为探针序列较短时错配的影响会更加明显。其余的RT 1和RT 2引物序列以及所用的PCR引物是完全相同的。使用RT 2引物时,完全匹配和错配的模板之间的ΔCq(ΔCq= 11.07)显著大于使用RT 1引物(ΔCq = 4.66),不带有5′-hemiprobe的不同碱基重叠的RT 2引物,而不是不带有RT 1引物的RT 2引物。这证明了5'-半探针对系统特异性的重大贡献。值得注意的是,两种双尾RT引物完全互补的let-7a microRNA的Cq值相等,表明即使5′-hemiprobe的长度有两个碱基的不同,检测灵敏度仍然相同。

 

2.適用樣本類型豐富:

5′-hemiprobe.png

新鮮組織,冷凍/福爾馬林固定組織的

血浆/ 血清/ 尿液/ 脑脊液/ 生物液体新鮮組織,冷凍/福爾馬林固定組織的

細胞,外泌體

細胞,外泌體

 

3.miRNA定量的試劑盒檢測流程簡便:

5′-hemiprobe-3.jpg

相关miRNA定量的试剂盒産品推荐:

産品货号産品名称品牌
RMR001RmiRNA Isolation Kit Cells-ExosomesBioVendor
RMR002RmiRNA Isolation Kit Plasma-SerumBioVendor
RMR003RmiRNA Isolation Kit FFPEBioVendor
RMR004RmiRNA Isolation Kit TissuesBioVendor
RDTTRT50TT cDNA synthesis system - 50 rxnsBioVendor
RDTTPCR150TT qPCR MasterMix - 150 rxnsBioVendor
RDTT000****PRITT assay primers (RT+qPCR) - 50+150 rxnsBioVendor
RDM00***miREIA complex kit - 96 well formatBioVendor

 

看到這兒,您心動了嗎?馬上聯系小艾吧!

代理品牌分類
最近促銷 MORE
特色産品 MORE
现货産品 MORE
  • 高品質保障 先進的生産研發技術
  • 高性價比 價宜質優,性價比高
  • 100%保證 從購買到使用,放心無憂
  • 安全運輸 完善的保护措施安全運輸

微信掃碼在線客服

微信咨詢

全国免费技術支持

400-6800-868

在線客服